產(chǎn)品概述
2×SYBR Green PCR Master Mix 是采用 SYBR Green I 嵌合熒光法進(jìn)行 Real Time PCR 的專用試劑。含有常溫下完全封閉Taq 酶活性的熱啟動酶 HS Taq DNA Polymerase,能夠有效抑制低溫條件下引物非特異性退火或者引物二聚體引起的非特異性擴增，提高擴增反應(yīng)的特異性。本試劑經(jīng)過特殊配制，采用優(yōu)化配方的 qPCR 專用 Buffer，大大提高了 qPCR 反應(yīng)的擴增效率和檢測靈敏度，可以在較寬的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，準(zhǔn)確進(jìn)行定量。本試劑與多數(shù)廠家的熒光定量 PCR 儀兼容，如Applied Biosystems、Eppendorf、Bio-Rad 和Roche 等。
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產(chǎn)品組成
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BTB1001S
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BTB1001
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2×SYBR Green PCR Master Mix
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1ml
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5×1ml
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ROX Reference Dye I(50×)
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40μL
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200μL
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ROX Reference Dye II(50×)
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40μL
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200μL
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儲存條件：
本產(chǎn)品-20℃保存有效期至少一年，4℃可保存3個月。解凍后應(yīng)充分混勻，避免產(chǎn)生大量氣泡。
qPCR反應(yīng)體系配制：
建議的模板量 10～100ng（基因組 DNA）或 1～10ng（cDNA 模板）。
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試劑
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20μl 體系
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50μl 體系
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終濃度
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2×SYBR Green PCR Master Mix
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10μl
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25μl
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1×
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Primer 1（10μM）
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0.4～2μl
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1～5μl
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0.2～1.0μM
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Primer 2（10μM）
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0.4～2μl
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1～5μl
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0.2～1.0μM
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Template DNA
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4μl
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10μl
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ddH2O
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-
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Total volume
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20μl
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50μl
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適用機型：
以下機型無需使用ROX Reference Dye校正：
Roche LightCycler 480，Roche Light Cycler 96，MJ Research Chromo4，MJ Research Opticon 2，Takara TP-800, Bio-Rad iCycler iQ,Bio-Rad iCycler iQ5,Bio-Rad CFX96,Bio-Rad C1000 Thermal Cycler,Thermo Scientific Pikoreal 96, Qiagen Corbett Rotor-Gene 6000,Qiagen Corbett Rotor-Gene G,Qiagen Corbett Rotor-Gene Q,Qiagen Corbett Rotor Gene 3000，Mastercycler ep realplex。
以下機型進(jìn)行ROX Reference Dye校正模式，需額外添加校正染料:
?使用ROX Reference DyeI (50x) 的PCR儀(使用時終濃度為1x)
ABI Prism 7000/7300/7700/7900，ABI Step One, ABI Step One Plus，ABI 7900HT，ABI 7900HT Fast StepOnePlus Real-Time PCR System。
?使用ROX Reference DyelI (50x) 的PCR儀(使用時終濃度為1x)
ABI Prism 7500，ABI Prism 7500 Fast, ABI QuantStudio DX/3/5, ABI QuantStudio 6/7/12K Flex, ABI ViA 7, Stratagene Mx3000P/Mx 3005P/Mx 4000
標(biāo)準(zhǔn)GMP生產(chǎn)車間
SYBR Green PCR Master Mix 生產(chǎn)和測試
質(zhì)量評估指標(biāo)：
1、Cq值相比主流品牌差異；
2、NTC有無非特異性擴增；
3、擴增效率相比主流品牌差異；
4、模板在低拷貝極限下，特異性擴增相比主流品牌差異；
5、平臺期的熒光值相比主流品牌差異；
6、批次之間擴增曲線、溶解曲線重復(fù)性情況；
7、模擬運輸環(huán)境測試，產(chǎn)品性能重復(fù)性情況。
進(jìn)行人源β-actin擴增
以人源的CDNA原液進(jìn)行8倍梯度稀釋，稀釋9個點進(jìn)行擴增。
模擬4℃冰袋運輸4天的性能測試
測試結(jié)果描述
1、Cq值比主流品牌更優(yōu)；
2、NTC無非特異性擴增；
3、擴增效率比主流品牌更優(yōu)；
4、模板在低拷貝極限下，特異性擴增和主流品牌一致；
5、平臺期的熒光值比主流品牌更優(yōu)；
6、批次之間擴增曲線、溶解曲線表現(xiàn)穩(wěn)定；
7、模擬運輸環(huán)境測試，產(chǎn)品性能表現(xiàn)穩(wěn)定。
北京畢特博生物技術(shù)有限公司
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